四環(huán)素廣泛用做抗菌藥，四環(huán)素類抗生素主要包括土霉素、四環(huán)素(TC)和金霉素(CTC)，目前常用于預(yù)防和治療動(dòng)物疾病。如果不合理地使用該類藥物，如劑量過大，用藥時(shí)間過長(zhǎng)，濫用藥物以及不遵守休藥期提前屠宰等都會(huì)使該類藥物殘留于動(dòng)物組織及牛乳中，被人們食用后帶來極大危害，可造成致畸、致癌。為了有效預(yù)防四環(huán)素類藥物的濫用，我國明確規(guī)定四環(huán)素類藥物在牛乳中的大殘留*。

1．速測(cè)原理

采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物四環(huán)素類藥物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)四環(huán)素類藥物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物四環(huán)素類藥物的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較可得出相應(yīng)殘留物四環(huán)素類藥物的含量。

2．速測(cè)范圍

本法適用于動(dòng)物組織(豬、雞、魚、蝦)、牛乳、蜂蜜中的四環(huán)素類藥物殘留。檢測(cè)下限10ug/kg。

3．速測(cè)步驟

(1)取約5g樣品于研缽中，加入一瓶提取劑研磨約3～5min，用濾紙過濾后擠干殘?jiān)?，收集濾液5mL。

(2)依次加2mL再生劑、5mL蒸餾水于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄，將濾液加入層析柱過柱，吸耳球上加壓，廢液舍棄，待濾液流干后，用5mL蒸餾水(純凈水)于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄。

(3)用0.8mL洗脫劑加到此層析柱中，吸耳球上加壓，接流出液于點(diǎn)滴板上，自然揮干后，用0.3 mL PBST充分溶解殘留物，將液體移取到5mL離心管中，加0.3mL凈化劑，振搖，靜置，吸取至少100uL下層溶液待檢。

4．結(jié)果判定(圖4-4)

(1)陰性(-)。T線(測(cè)試線，靠近加樣孔一端)比C線(對(duì)照線)深或一樣深，表示樣品中四環(huán)素濃度低于檢出限或不含四環(huán)素殘留物。

(2)陽性(+)。T線比C線淺，或T線無顯色，表示樣品中四環(huán)素濃度高于檢出限；T線比C線越淺，表示樣品中四環(huán)素濃度越高。

(3)無效。未出現(xiàn)C線，表示操作過程不正確或試劑板已變質(zhì)失效。此情況下，應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，并用新的試劑板重新測(cè)試。

5．說明

(1)使用前將試劑板和待檢樣本溶液恢復(fù)至室溫；

(2)盡量不要觸摸試劑板中央的白色膜面；

(3)層析柱再生：層析柱可重復(fù)使用，用完后的層析柱依次加2mL再生劑及5mL蒸餾水于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄。可備下次使用。

文章來源：《食品安全快速檢測(cè)技術(shù)》

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